冰冻切片普鲁士蓝染色实验报告
发布时间: 2026-08-18 14:29:21.620
普鲁士蓝染色实验报告
一、实验器材及试剂
1、实验器材
名称 | 厂家 | 型号 |
脱水机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JJ-12J |
包埋机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JB-P5 |
病理切片机 | 上海徕卡仪器有限公司 | RM2016 |
冻台 | 武汉俊杰电子有限公司 | JB-L5 |
组织摊片机 | 武汉俊杰电子有限公司 | KD-P |
烤箱 | 天津市莱玻瑞仪器设备有限公司 | GFL-230 |
载玻片 | 南通美韦德生命科学有限公司 | PC2-301 |
正置光学显微镜 | 日本尼康 | Nikon Eclipse ci |
成像系统 | 日本尼康 | Nikon DS-U3 |
2、主要实验试剂
试剂名称 | 厂家 | 货号 |
无水乙醇 | 国药集团化学试剂有限公司 | 100092683 |
二甲苯 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10023418 |
普鲁士蓝染液套装 | 武汉百仟度生物科技有限公司 | C2140 |
中性树胶 | 武汉百仟度生物科技有限公司 | C1009 |
OCT包埋剂 | 武汉百仟度生物科技有限公司 | C2200 |
二、实验步骤:
1、冰冻切片预处理:取出-20℃冷冻保存的组织冰冻切片(切片厚度8~10μm),置于室温复温10~15min,充分晾干切片表面水汽,避免组织脱落。无需脱蜡处理,用蒸馏水轻柔冲洗切片2~3min,去除切片表面残留的OCT包埋剂、冰晶及杂质,保持组织面洁净完整。
2、组织固定:将预处理完成的脑组织切片完全浸入4%多聚甲醛固定液中,室温条件下固定15~20min,稳固脑组织细胞与组织结构,避免后续漂洗、染色、脱水过程中组织破损、脱落。固定结束后,用蒸馏水充分冲洗切片3次,每次2min,彻底洗净残留固定液,避免残留试剂干扰染色反应。
3、普鲁士蓝染色:将亚铁氢化钾溶液和盐酸溶液等比例混合成普鲁士蓝染液,切片入染液中染色1h,蒸馏水洗2遍。
4、核固红染色:核固红染液染色1-5min,流水冲洗。
5、脱水封片:切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲苯 Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。
6、显微镜镜检,图像采集分析。
三、结果判读:
铁离子呈蓝色,细胞核红色。
四、注意事项:
1、普鲁士蓝染液要现配现用。
2、切片染色前用蒸馏水洗干净,防止自来水中的铁离子在染色中反应,造成假阳性。
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